在细胞凋亡的早期阶段，细胞膜内侧的磷脂酰丝氨酸（PS）转移到外侧，暴露在细胞外环境中。这导致细胞膜的通透性增加，使得PS能够与Annexin-V探针特异性结合。目前，Arcegen提供了一种适用于早期凋亡检测的Annexin-V细胞凋亡检测试剂盒。Annexin-V是一种依赖于Ca2+的磷脂结合蛋白，对PS具有很强的亲和力。此外，该检测试剂盒还提供PI/7-AAD用于双重染色。由于正常细胞不会被染色，早期凋亡细胞可以被Annexin-V标记，而坏死或晚期凋亡细胞则被PI/7-AAD染色，从而可以清晰地区分不同阶段的细胞。
图2. Annexin-V实验的原理
性能亮点:
1. Annexin-V探针的多种荧光标记
Annexin-V可以被标记上不同的荧光团，包括PE、FITC、Alexa Fluor 488等，这些荧光团针对的是细胞膜上磷脂酰丝氨酸（PS）的外化。在不同的激发和发射通道下，它们会发出绿色或红色的荧光信号，可以与核探针等其他标记结合使用，进行多色细胞染色。
图3a. 使用Annexin-V-Fluor647（红色）染色的细胞，来源：参考文献
图3b. 使用Annexin-V-FITC（绿色）染色的细胞，来源：参考文献
2. 高灵敏度和特异性的Annexin-V探针
在纳摩尔浓度水平下，Annexin-V能够选择性地识别并标记早期凋亡细胞中外部化的PS，不会标记其他DNA或RNA，从而能够检测到极少量的凋亡细胞。
3. 低背景干扰和强稳定性
没有来自其他荧光颜色的背景干扰，使得染色清晰。此外，不同批次之间的性能保持稳定。
此外，在早期凋亡过程中，线粒体膜电位的降低会导致膜通透性的变化。JC-1染料可以检测线粒体膜电位的变化。在正常的线粒体中，JC-1发出强烈的红色荧光。然而，在凋亡的早期阶段，由于膜电位的降低或丧失，JC-1产生绿色荧光。荧光的增强或减少可以反映线粒体内膜电子亲和力的增加或减少。